| 张晓芳,张宜群,王珩.桂枝茯苓丸逆转LncRNA H19介导的 miR-195-5p/SGK1 通路治疗子宫内膜癌的机制研究[J].浙江中西医结合杂志,2021,31(9): |
| 桂枝茯苓丸逆转LncRNA H19介导的 miR-195-5p/SGK1 通路治疗子宫内膜癌的机制研究 |
| A study on the Mechanism of Guizhi Fuling Wan reversing LncRNAH19-mediated miR-195-5p/SGK1 Pathway in the treatment of endometrial carcinoma |
| 投稿时间：2020-11-03 修订日期：2021-07-30 |
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| 中文关键词: 桂枝茯苓丸 子宫内膜癌 H19 miR-195-5p SGK1 增殖 自噬 |
| 英文关键词: |
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| 中文摘要: |
| 目的：探究桂枝茯苓丸抑制子宫内膜癌发展中的作用和分子机制。方法：进行qRT-PCR检测H19在人正常子宫内膜细胞EMC和子宫内膜癌细胞HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa细胞中的表达。向Ishikawa细胞中转染sh-H19，利用细胞计数试剂盒8（CCK8）检测细胞生长活力。流式细胞术评估细胞凋亡率。qRT-PCR和western blot分析自噬标志蛋白P62 、Beclin1和LC3II的表达。采用双荧光素酶报告基因检测验证H19与 miR-195-5p及miR-195-5p与SGK1的靶向结合关系。将oe-H19 转染到Ishikawa细胞中，并将转染oe-H19的Ishikawa细胞在桂枝茯苓丸含药培养液中培养。qRT-PCR检测结果H19的表达，CCK-8、流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡，WB检测自噬相关蛋白P62 、Beclin1和LC3II的表达。
结果：qRT-PCR检测结果显示与人正常子宫内膜细胞EMC（1.00±0.32）相比，H19在子宫内膜癌细胞HEC-1A（1.7±0.12*）、HEC-1B（2.1±0.13 *）、Ishikawa（3.2±0.09 **）中的表达显著升高。CCK-8结果表明，与对照组（100.00±8.12）%相比，下调H19使子宫内膜癌细胞的增殖活性显著降低（45.00±3.95*）%。细胞凋亡测定实验显示sh-H19组的细胞凋亡率较对照组明显较高[（5.62±0.57）%比（9.63±9.36*）%）]。Western blot检测显示H19敲低的子宫内膜癌细胞中P62的表达显著降低，Beclin1和LC3II的表达显著上调。双荧光素酶报告基因检测和western blot结果表明H19靶向负调控miR-195-5p的表达，miR-195-5p靶向抑制SGK1的表达。在挽救实验中，qRT-PCR检测发现与oe-NC组（1.00±0.09）相比，oe-H19组（3.2±0.29aa ）Ishikawa细胞中H19的含量显著增高，而桂枝茯苓丸能够逆转oe-H19转染引起的H19水平上升（1.14±0.12b）。oe-H19组（240.00±15.89 a）%细胞存活率较oe-NC组（100.00±7.88）%显著增高。将转染oe-H19的Ishikawa细胞在桂枝茯苓丸含药培养液中培养后，发现与oe-H19组相比，经桂枝茯苓丸含药培养液处理的Ishikawa细胞的增殖显著降低（92.00±8.47 b）%。与oe-NC组相比，oe-H19组Ishikawa细胞中P62的表达显著提高，Beclin1和LC3II的表达显著下调。而经桂枝茯苓丸含药培养液处理后P62 Beclin1和LC3II的部分恢复。结论：桂枝茯苓丸可以抑制LncRNA H19介导的 miR-195-5p/SGK1 通路，进而抑制子宫内膜癌细胞的增殖，促进细胞自噬。 |
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