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严双凤,徐志波.穗花杉双黄酮调控miR-140-5p介导脂多糖致急性肺损伤的机制研究[J].浙江中西医结合杂志,2020,30(7):
穗花杉双黄酮调控miR-140-5p介导脂多糖致急性肺损伤的机制研究
投稿时间:2020-03-11  修订日期:2020-05-29
DOI:
中文关键词:  急性肺损伤  中药单体  炎症因子  炎症  microRNA
英文关键词:
基金项目:
作者单位E-mail
严双凤 湖州市中心医院 shuangfeng2283@163.com 
徐志波 浙江中医药大学附属第二医院  
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中文摘要:
      目的 探究穗花杉双黄酮对脂多糖(lipopolysaccharides ,LPS)致大鼠急性肺损伤(acute lung injury ,ALI)的保护作用及机制研究。方法 将60只大鼠随机分为4组:对照组、模型组、阳性对照组、实验组。模型组、阳性对照组和实验组大鼠均通过气道滴注3.00 mg/kg LPS 100μl,空白对照组气道滴注等体积的生理盐水,6 h后阳性对照组大鼠腹腔注射地塞米松(2.5 mg/kg),实验组大鼠腹腔注射穗花杉双黄酮(2.5 mg/kg),对照组和模型组注射等体积生理盐水。48 h后称重测定大鼠肺组织湿/干比;苏木精-伊红染色( hematoxylin-Eosin staining,HE )观察各组大鼠肺组织病理结构;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;RT-PCR检测miR-140-5p在肺组织中的表达情况;蛋白印迹法(western Blot,WB)检测肺组织中Toll样受体4(Toll Like Receptor 4,TLR4)、核因子活化B细胞κ轻链增强子(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)蛋白表达水平。RT-PCR检测肺组织中miR-140-5p的表达情况。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RT-PCR检测TLR4、NF-κB的表达。结果 实验组肺组织湿/干比明显低于模型组(P<0.05);HE染色结果显示实验组大鼠肺组织结构相比于ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显减轻;ELISA结果显示实验组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组(P<0.05);WB结果发现实验组大鼠肺组织中TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示实验组大鼠肺组织和细胞中miR-140-5P表达均明显高于模型组(P<0.05),而miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB的表达(P<0.05)。结论 穗花杉双黄酮能明显缓解LPS诱导的大鼠ALI,降低肺损伤病理进程中血清TNF-α、IL-6和IL-1β的含量,对ALI起保护作用,其作用机制可能是通过促进了miR-140-5P的表达,从而减低ALI炎症过程中关键炎症信号TLR4、NF-κB的表达。
英文摘要:
      
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